本发明提供了n-(4-(1-氰基环戊基)苯基)-2-((2-羟基-1,2-二(吡啶-4-基)乙基)氨基)烟酰胺(式a化合物)或其可药用盐及制备方法、用途。
背景技术：
：vegfr的小分子抑制剂日渐成为一种非常具有应用前景的新型非细胞毒抗肿瘤药物。与抑制肿瘤生长的传统细胞毒药物相比，靶向新生血管生成的治疗药物具有更高的特异性、更低的毒性，以及有利于克服肿瘤的耐药性，并且可用于多种肿瘤的治疗。cn1281590c公开了n-[4-(1-氰基环戊基)苯基]-2-(4-吡啶甲基)氨基-3-吡啶甲酰胺(化合物c)是新一代vegfr的小分子抑制剂，同时，cn101676267b报道了n-[4-(1-氰基环戊基)苯基]-2-(4-吡啶甲基)氨基-3-吡啶甲酰胺的甲磺酸盐，结构如下：在新药研究和开发过程中，药物质量是衡量药物品质的重要标准，药物质量首先取决于药物自身的疗效和毒副作用，其次是药物的有效成分的含量。而药物的有关物质(或杂质含量)直接影响到药物的疗效并可能导致毒副作用。同时，为了安全有效的用药，需要严格控制药物有效成分的纯度、杂质的限度，提供高质量标准的药物。因此，在药物的生产、储存以及运输过程中必须严格可控制药物杂质的产生。众所周知，药物原料或其制剂中的单一杂质需要控制在一定水平以内，例如0.5％以下，0.4％以下，0.3％以下，0.2％以下，0.1％以下等。药物原料在其储藏有效期内杂质增长也不能超过前述限度内。技术实现要素：本发明提供了一种n-(4-(1-氰基环戊基)苯基)-2-((2-羟基-1,2-二(吡啶-4-基)乙基)氨基)烟酰胺(式a化合物)或其可药用盐，本发明的药物研究人员发现，n-[4-(1-氰基环戊基)苯基]-2-(4-吡啶甲基)氨基-3-吡啶甲酰胺在成盐过程极易受反应条件的影响，易于产生杂质式a化合物，尤其在公斤级(如10kg)生产过程中，多批预公斤级别生产其杂质含量总维持在0.16％～1.87％(粗品中)，而在此前小试甚至中试工艺(如1kg以下)并未出现。该问题的出现直接影响n-[4-(1-氰基环戊基)苯基]-2-(4-吡啶甲基)氨基-3-吡啶甲酰胺盐的工业生产，制约着原料药的供应，制剂的生产，以及其市场供给。从机理上，目前尚未掌握其来源，其药理毒理实验仍在进行中，尚未明确具有药理毒理数据，但是式a化合物是成盐过程产生的，同时是公斤级(如10kg)过程中出现的，这必然影响整体工艺的收率，同时降低了有效成分的含量，并且会影响了药物的药效，更有甚者大概率会引起毒副作用，如基因毒性等。因此，制备并提供纯净的化合物a便于对该化合物结构认识，理解杂质的产生原理，为控制杂质产生提供思路，解决其工业生产的问题，解决产能低，满足市场需求。同时，也便于研究该化合物的物理或化学特性，了解该化合物的安全性和药效，完成药学上杂质影响因子研究，完成医学上毒理学等研究，为制备高品质和高质量的药物组合物提供保障。本发明还提供了制备式a化合物的方法，该方法包括以下步骤：1)将n-[4-(1-氰基环戊基)苯基]-2-(4-吡啶甲基)氨基-3-吡啶甲酰胺与甲磺酸于60～100℃搅拌反应，2)冷却，过滤，将母液使用制备型液相系统制备，分离得式a化合物。进一步地，其制备液相条件为：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1％甲酸水溶液为流动相a，乙腈为流动相b，等度洗脱，检测波长为220nm，流动相a/流动相b体积比为75/25。本发明还提供式a化合物在n-[4-(1-氰基环戊基)苯基]-2-(4-吡啶甲基)氨基-3-吡啶甲酰或其可药用盐原料药、制剂的有关物质检测时作为杂质对照品的用途，在可选实施方案中，n-[4-(1-氰基环戊基)苯基]-2-(4-吡啶甲基)氨基-3-吡啶甲酰或其可药用盐原料药、制剂的有关物质检测方法：供试品溶液的配制：取化合物c或其可药用盐25mg，置于50ml量瓶中，加溶剂(水:乙腈＝70:30)溶解并稀释至刻度，摇匀；或取含化合物c或其可药用盐的片剂，研磨后取细粉45mg，加溶剂(水:乙腈＝70:30)溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤以备用；对照品溶液的配制：取式a化合物或其可药用盐25mg，置于50ml量瓶中，加溶剂(水：乙腈＝70:30)溶解并稀释至刻度，取1ml于100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀以备用；色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.01mol/l磷酸二氢钾溶液为流动相a，乙腈为流动相b，梯度洗脱，检测波长为260nm，梯度洗脱程序如下：分别量取供试品溶液、对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。本发明提供了一种供药用的原料药n-[4-(1-氰基环戊基)苯基]-2-(4-吡啶甲基)氨基-3-吡啶甲酰或其可药用盐的原料药，其含有式a化合物或其可药用盐，进一步地，所述原料药中含有式a化合物，式a化合物的含量低于0.3％、低于0.10％、或低于0.05％。在非限制性实施例中，式a化合物的含量可以为0.30％、0.29％、0.28％、0.27％、0.26％、0.25％、0.24％、0.23％、0.22％、0.21％、0.20％、0.19％、0.18％、0.17％、0.16％、0.15％、0.14％、0.13％、0.12％、0.11％、0.10％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％或更低。本发明还提供了制备前述原料药的方法，该方法包括：n-(4-(1-氰基环戊基)苯基)-2-((2-羟基-1,2-二(吡啶-4-基)乙基)氨基)烟酰胺与甲磺酸成盐，析晶，过滤步骤，其中冷却析晶温度不高于20℃，可以为20℃、19℃、18℃、17℃、16℃、15℃、14℃、13℃、12℃、11℃、10℃、9℃、8℃、7℃、6℃、5℃、4℃、3℃、2℃、1℃、0℃，优选不高于15℃。研究人员发现，在工业生产过程中合适的析晶温度能有效控制杂质化合物a的含量，正如实施例4中所陈述。本发明还提供一种药物组合物，其含有前述原料药及药学上可接受的赋形剂。在非限制实施例中，本发明所述药物组合物可以进一步制备成注射液或固体制剂，所述固体制剂选自但不限于片剂、丸剂、颗粒剂、冻干粉针剂或胶囊剂。进一步地，所述固体制剂中赋形剂为本领域技术人员所熟知或可以确定的，选自但不限于崩解剂、填充剂、粘合剂、润滑剂中的至少一种；所述注射液赋形剂选自但不限于无毒性的生理学可接受的液体载体，如生理盐水、注射用水、5％葡萄糖注射液、葡萄糖氯化钠注射液，ph调节剂或防腐剂中的至少一种。本发明所述可药用盐选自盐酸盐，硫酸盐、甲磺酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐或富马酸盐，优选自甲磺酸盐。本发明有关物质或杂质含量通过hplc来确定，条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.01mol/l磷酸二氢钾溶液为流动相a，乙腈为流动相b，检测波长为260nm。本发明化合物结构通过核磁共振(nmr)或/和质谱(ms)来确定。nmr位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。nmr的测定是用varianmercury-400核磁仪共振仪，测定溶剂为氘代甲醇，内标为四甲基硅烷(tms)；ms的测定用synaptq-tof质谱仪(生产商：waters公司)。本发明所述用试剂可通过商业途径获得，n-[4-(1-氰基环戊基)苯基]-2-(4-吡啶甲基)氨基-3-吡啶甲酰可参照cn106243031b制备。具体实施方式以下将结合实施例或实验例更详细地解释本发明，本发明的实施例或实验例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质和范围。实施例1：将n-[4-(1-氰基环戊基)苯基]-2-(4-吡啶甲基)氨基-3-吡啶甲酰和甲磺酸在90℃反应，冷却，过滤，将母液使用制备型液相系统制备，分离得式a化合物甲磺酸盐制备液相条件为：制备柱型号：50mm内径柱10μm疏水c18填料检测波长：220nm流速：60ml/min流动相：a：纯化水(0.1％甲酸)b：乙腈梯度表时间(min)a(％)b(％)07525607525质谱：[m1+h]+＝505.38；1h-nmr(400mhz,cd3od)1.28(m,2h)1.98-2.03(m,5h),2.12-2.19(m,2h),2.43-2.48(m,2h),5.23-5.25(d,1h),5.55-5.56(d,1h),6.63-6.66(q,1h),7.23-7.25(d,2h),7.30-7.32(d,2h),7.50-7.52(d,2h),7.73-7.75(d,2h),8.02-8.08(m,2h),8.31-8.32(d,2h),8.38-8.39(d,2h)；13c-nmr(400mhz,cd3od)24.96,41.27,60.48,75.09,112.75,113.10,122.65,123.52,125.52,125.56,127.60,137.09,138.21,139.47,149.11,149.62,151.39,152.34,153.56,158.11,168.82。实施例2：在250l反应釜中，投入9kgn-[4-(1-氰基环戊基)苯基]-2-(4-吡啶甲基)氨基-3-吡啶甲酰(化合物c)，95％异丙醇水溶液135l，随后加入2.05kg甲磺酸，加热溶解后，压滤，冷却0～10℃析晶，过滤，洗涤，干燥，得白色固体，收率90％。有关物质检测供试品溶液的配制：取n-(4-(1-氰基环戊基)苯基)-2-((2-羟基-1,2-二(吡啶-4-基)乙基)氨基)烟酰胺甲磺酸盐25mg，置于50ml量瓶中，加溶剂(水:乙腈＝70:30)溶解并稀释至刻度，摇匀；对照品溶液的配制：取式a化合物甲磺酸盐25mg，置于50ml量瓶中，加溶剂(水：乙腈＝70:30)溶解并稀释至刻度，取1ml于100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀以备用；色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.01mol/l磷酸二氢钾溶液为流动相a，乙腈为流动相b，梯度洗脱，检测波长为260nm，梯度洗脱程序如下：分别量取供试品溶液、对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：化合物中式a化合物含量为0.01％，相对保留时间：0.74。实施例3：由实施例2原料药制备的片剂制剂有关物质检测供试品溶液的配制：取片剂，研磨后取细粉45mg，加溶剂(水:乙腈＝70:30)溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤以备用；对照品溶液的配制：取式a化合物甲磺酸盐25mg，置于50ml量瓶中，加溶剂(水：乙腈＝70:30)溶解并稀释至刻度，取1ml于100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀以备用；色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.01mol/l磷酸二氢钾溶液为流动相a，乙腈为流动相b，梯度洗脱，检测波长为260nm，梯度洗脱程序如下：分别量取供试品溶液、对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：制剂中式a化合物0.01％，符合药品质量标准。实施例4：析晶温度考察在500ml反应瓶中，加入n-(4-(1-氰基环戊基)苯基)-2-((2-羟基-1,2-二(吡啶-4-基)乙基)氨基)烟酰胺15g，甲磺酸3.75g，95％异丙醇水溶液240ml，加热溶解，趁热过滤，冷却析晶，异丙醇洗涤，干燥，得白色固体。析晶温度杂质含量a样品纯度140～45℃0.83％98.25％225～30℃0.36％99.37％310～18℃0.025％99.78％40～10℃0.011％99.81％5零度以下0.013％99.13％b注：a杂质为式a化合物甲磺酸盐，在液相条件下，盐与化合物出峰位置相当；b析晶温度过低，不利其他杂质除去。当前第1页12