中文名称:阳离子脂质纳米粒子 / 阳离子脂质体
英文名称:Cationic Lipid Nanoparticle / Cationic LNP / Cationic Liposome
外观形态:纳米粒子分散体系,在水相中呈球形纳米构型
粒径范围:一般在50–150 nm之间
供应商参考:瑞禧生物
阳离子脂质纳米粒子,是一类粒子表面携带正电荷的脂质递送系统。其核心设计原理,在于利用阳离子脂质与带负电的核酸分子之间的静电相互作用,完成对DNA、RNA、siRNA、mRNA等遗传物质的高效封装与保护。这类体系由四种核心脂质组分协同构建:阳离子脂质(如DOTAP、咪唑鎓脂质等)、辅助性脂质(如DOPE、DSPC)、胆固醇以及PEG化脂质。其中,PEG化脂质在粒子粒子表面构成亲水屏障,调控粒径并延长体内循环时间;DOPE则充当"融合脂质",促进脂质体与细胞膜的融合及内涵体逃逸,从而提升核酸的胞内递送效率。
科研试验核心步骤
阳离子脂质体介导的核酸转染,是一种快速、简便、可重复的方法,适应用于贴壁细胞、悬浮细胞、昆虫细胞及原代培养细胞。以下为标准化操作框架:
步骤一:细胞准备与铺板
确保细胞处于对数生长期,状态健康、无污染。转染前更换新鲜培养基,体积约2 mL(以六孔板为例)。转染前一天,以适当密度(贴壁细胞汇合度控制在70%–90%,悬浮细胞约5×10⁵–2×10⁶个/mL)将细胞接种至培养板中。
步骤二:试剂稀释
从科研使用角度看,取两个无菌离心管,分别稀释核酸与脂质体试剂。例如:在250 μL无血清DMEM中加入4 μg质粒,轻柔混匀;另取250 μL DMEM加入6 μL阳离子脂质体转染试剂,室温孵育5分钟。注意:不可涡旋或离心,仅轻柔混匀即可。
步骤三:复合物构成
期间可能出现絮状沉淀,属正常现象,不影响后续转染。此时,脂质体粒子表面正电荷与核酸负电荷已充分整合,构成紧凑的纳米复合物。将稀释后的DNA溶液与脂质体溶液轻柔合并,室温孵育20分钟。
步骤四:加入细胞与培养
将500 μL复合物均匀加入培养孔中,轻柔摇晃混匀。贴壁细胞孵育6小时后更换新鲜完全培养基;悬浮细胞试验中建议采用平角离心法(200 g,1.5小时),再转入培养箱继续培养6小时后换液。
步骤五:表征与验证
从科研使用角度看,基因表达表征一般在转染后24–40小时开展,可借助荧光显微镜观察报告基因(如GFP)表达。若需构建稳定可靠细胞株,转染24小时后可加入G418或嘌呤霉素等筛选药物,持续筛选至稳定可靠克隆构成。
关键注意事项
血清与抗生素:复合物构成阶段试验中建议无血清;转染培养基中严禁使用抗生素,因脂质体可增加细胞膜通透性,导致抗生素毒性升高。
DNA质量:A260/A280比值应达1.8,推荐使用无内毒素质粒提取试剂盒构建高纯度DNA。
细胞状态:避免细胞过度汇合或处于固定相,否则转染效率将明显下降。
瑞禧生物作为专注于纳米靶向科研样品的生物科技企业,自主研发Ruixibio®品牌样品,涵盖多类阳离子脂质体及脂质纳米粒子相应试剂:
DOTAP阳离子脂质体包裹mRNA 核酸复合物定制
DOTAP阳离子脂质体包裹siRNA 定制规格
DOTAP/DOPE LNP(50:50摩尔比) 阳离子脂质纳米粒子
空白阳离子LNP(不含核酸) 基础载体
FITC标记阳离子LNP 荧光示踪用
转铁蛋白功能修饰阳离子LNP 靶向递送型
叶酸功能修饰阳离子LNP 靶向递送型
甘露糖功能修饰靶向阳离子LNP 免疫细胞靶向
TAT穿膜肽功能修饰阳离子LNP 增强胞内递送
PEG化阳离子LNP包裹miRNA 小RNA递送
透明质酸功能修饰DOTAP/DOPE脂质体 肿瘤靶向型
DOTAP/胆固醇阳离子脂质体 多种配方可选
DOTAP/DOPE脂质体冻干粉 便于储运
从科研使用角度看,同时,瑞禧生物还可提供合成磷脂、PEG衍生物、嵌段共聚物(PLGA/PLA/PEG/PS等多种组合)等上游原料,支持科研人员从原料到成品的全链条定制。公司样品纯度大于95%,可可提供核磁图谱验证,末端基团取代率大于90%,PDI聚合度小于1.4,满足高标准科研需求。

