中文名称:阳离子脂质纳米颗粒 / 阳离子脂质体
英文名称:Cationic Lipid Nanoparticle / Cationic LNP / Cationic Liposome
外观形态:纳米颗粒分散液,在水相中呈球形纳米结构
粒径范围:通常在50–150 nm之间
供应商参考:西安瑞禧生物科技有限公司
阳离子脂质纳米颗粒,是一类表面携带正电荷的脂质递送系统。其核心设计原理,在于利用阳离子脂质与带负电的核酸分子之间的静电相互作用,实现对DNA、RNA、siRNA、mRNA等遗传物质的高效包封与保护。这类材料由四种核心脂质组分协同构建:阳离子脂质(如DOTAP、咪唑鎓脂质等)、辅助性脂质(如DOPE、DSPC)、胆固醇以及PEG化脂质。其中,PEG化脂质在颗粒表面形成亲水屏障,调控粒径并延长体内循环时间;DOPE则充当"融合脂质",促进脂质体与细胞膜的融合及内涵体逃逸,从而提升核酸的胞内递送效率。
科研实验核心步骤
阳离子脂质体介导的核酸转染,是一种快速、简便、可重复的方法,适用于贴壁细胞、悬浮细胞、昆虫细胞及原代培养细胞。以下为标准化操作框架:
步骤一:细胞准备与铺板
转染前一天,以适当密度(贴壁细胞汇合度控制在70%–90%,悬浮细胞约5×10⁵–2×10⁶个/mL)将细胞接种至培养板中。确保细胞处于对数生长期,状态健康、无污染。转染前更换新鲜培养基,体积约2 mL(以六孔板为例)。
步骤二:试剂稀释
取两个无菌离心管,分别稀释核酸与脂质体试剂。例如:在250 μL无血清DMEM中加入4 μg质粒,轻柔混匀;另取250 μL DMEM加入6 μL阳离子脂质体转染试剂,室温孵育5分钟。注意:不可涡旋或离心,仅轻柔混匀即可。
步骤三:复合物形成
将稀释后的DNA溶液与脂质体溶液轻柔合并,室温孵育20分钟。期间可能出现絮状沉淀,属正常现象,不影响后续转染。此时,脂质体表面正电荷与核酸负电荷已充分结合,形成紧凑的纳米复合物。
步骤四:加入细胞与培养
将500 μL复合物均匀加入培养孔中,轻柔摇晃混匀。贴壁细胞孵育6小时后更换新鲜完全培养基;悬浮细胞建议采用平角离心法(200 g,1.5小时),再转入培养箱继续培养6小时后换液。
步骤五:检测与验证
基因表达检测通常在转染后24–40小时进行,可通过荧光显微镜观察报告基因(如GFP)表达。若需构建稳定细胞株,转染24小时后可加入G418或嘌呤霉素等筛选药物,持续筛选至稳定克隆形成。
关键注意事项
血清与抗生素:复合物形成阶段建议无血清;转染培养基中严禁使用抗生素,因脂质体可增加细胞膜通透性,导致抗生素毒性升高。
DNA质量:A260/A280比值应达1.8,推荐使用无内毒素质粒提取试剂盒制备高纯度DNA。
细胞状态:避免细胞过度汇合或处于固定相,否则转染效率将明显下降。
西安瑞禧生物科技有限公司作为专注于纳米靶向科研产品的生物科技企业,自主研发Ruixibio®品牌产品,涵盖多类阳离子脂质体及脂质纳米颗粒相关试剂:
DOTAP阳离子脂质体包裹mRNA 核酸复合物定制
DOTAP阳离子脂质体包裹siRNA 定制规格
DOTAP/DOPE LNP(50:50摩尔比) 阳离子脂质纳米颗粒
空白阳离子LNP(不含核酸) 基础载体
FITC标记阳离子LNP 荧光示踪用
转铁蛋白修饰阳离子LNP 靶向递送型
叶酸修饰阳离子LNP 靶向递送型
甘露糖修饰靶向阳离子LNP 免疫细胞靶向
TAT穿膜肽修饰阳离子LNP 增强胞内递送
PEG化阳离子LNP包裹miRNA 小RNA递送
透明质酸修饰DOTAP/DOPE脂质体 肿瘤靶向型
DOTAP/胆固醇阳离子脂质体 不同配方可选
DOTAP/DOPE脂质体冻干粉 便于储运
此外,瑞禧生物还提供合成磷脂、PEG衍生物、嵌段共聚物(PLGA/PLA/PEG/PS等多种组合)等上游原料,支持科研人员从原料到成品的全链条定制。公司产品纯度大于95%,可提供核磁图谱验证,末端基团取代率大于90%,PDI聚合度小于1.4,满足高标准科研需求。

