中文名称:脂质纳米颗粒包裹靶向小干扰RNA
英文名称:Targeted siRNA-Loaded Lipid Nanoparticles(LNP@Target-siRNA)
实验技巧精要
技巧一:复溶与分散处理
冻干粉从-20℃取出后,4℃平衡30分钟再开盖,避免冷凝水进入。加入等体积预冷PBS(pH 7.4),轻柔颠倒混匀10–15次,切勿涡旋。使用前短时水浴超声(<30 s)恢复单分散,禁用探头超声——高剪切力会破坏脂质膜完整性。
技巧二:转染浓度梯度摸索
建议siRNA终浓度设5、10、20、50 nM梯度。靶细胞系首次实验从10 nM起步,48小时后qPCR检测目标基因mRNA水平。若沉默效率不足,逐步提升至30–50 nM;若细胞活力下降明显,降低浓度或缩短暴露时间。
技巧三:对照体系设计
必须设置三组对照:①LNP Negative Control siRNA(阴性序列对照,排除载体本身干扰);②游离siRNA(裸核酸对照,量化LNP递送增益);③LNP空白载体(无siRNA,排除脂质毒性)。三组缺一不可,否则数据难以服众。
技巧四:血清耐受与培养基兼容
含50% FBS环境中,PEG化LNP可维持48小时分散稳定(粒径变化<15%)。转染时建议先在无血清培养基中孵育30分钟形成复合物,再补加含血清培养基至10%,兼顾摄取效率与细胞状态。
技巧五:内体逃逸验证
共染LysoTracker Green(溶酶体绿色探针)与DiD标记LNP,共聚焦下观察黄色重叠信号——若4小时后仍大量共定位,说明内体逃逸不充分,需考虑调整可电离脂质种类(如更换MC3为SM-102)或增加DOPE比例。
技巧六:冻融禁区
反复冻融是LNP的致命伤。务必分装保存:胶体分散液按单次用量分装至EP管,-80℃冻存;每次取一管解冻,解冻后不再回冻。操作全程佩戴丁腈手套与护目镜,溅出用吸水材料吸附并按化学废弃物处置。
西安瑞禧生物科技有限公司围绕LNP@Target-siRNA构建完整产品生态:
核心制剂 LNP@Target-siRNA(胶体/冻干粉) ≥95%纯度,粒径80–150 nm,包封率≥85%
荧光追踪 LNP FAM-siRNA、LNP CY5-siRNA 实时监测胞内摄取与分布
阴性对照 LNP Negative Control siRNA 排除载体非特异干扰
靶向变体 GalNAc-LNP siRNA(肝靶向)、AS1411-LNP siRNA(适配体)、Angiopep-2-LNP siRNA(血脑屏障) 多配体可选
原料配套 MC3、SM-102、DSPC、DOPE、Cholesterol、DSPE-PEG2000 全组分一站式供应
定制服务 按需siRNA序列、配体类型、粒径、包装 50 mg至克级灵活定制

