背景技术：
从1899年阿司匹林(asa)上市以来，非甾体类抗炎药(nsaids)在临床上的应用已有百年的历史。直至1971年人们首次发现asa主要通过抑制环氧化酶(cox)合成前列腺素(pg)而发挥抗炎解热镇痛的作用。其中，环氧化酶是催化花生四烯酸转化为前列腺素和相关化合物的限速酶。目前常见的环氧化酶有cox-1和cox-2两种，它们的氨基酸序列有60％同源性。区别在于cox-1广泛存在于机体各种细胞中，在生理状态下持续表达并促进前列腺素合成以维持机体的某些正常生理功能，cox-2在正常细胞中的表达量极低，只有在受到炎症和有丝分裂原刺激及某些生长因子的作用时，其表达增强并促进炎症反应的发展。传统的nsaids如阿司匹林、吲哚美辛对cox-1和cox-2没有选择性，易引起胃黏膜损伤、溃疡、穿孔和出血等多种胃肠道系统并发症。1998年，赛来昔布作为首个选择性cox-2抑制剂应用于临床，其在抗炎镇痛的同时消除由于抑制cox-1所产生的胃肠道副作用。cox-2抑制剂对炎症部位的前列腺素合成抑制效果较强，对胃黏膜前列腺素合成影响较轻，因此治疗的范围较大。总之，非甾体类药物是目前临床上炎症治疗应用最广泛的药物，随着对环氧化酶学理论的不断深入研究，活性好、选择性强的cox-2抑制剂仍将是未来nsaids研究的主攻方向。在深圳市科创委项目(jcyj20170412110504956)等支持下，基于中医理论，我们从具有消炎、消包块的虫类中药琵琶甲虫中发明了具有抗炎用途的化合物。本发明所涉及的化合物未见其有关抑制cox-2及抗炎方面的报道。
技术实现要素：
本发明提供一种含吡啶的化合物及其提取方法，该化合物具有抑制环氧化酶2的作用，在炎症相关疾病方面具有应用价值。
本发明实施例提供一种含吡啶的化合物，以下将其命名为4，4'-(pyridine-3，5-diyl)bis(benzene-1，2-diol)，该化合物的化学结构如式i所示：
所述化合物用于制备抑制环氧化酶2以治疗炎症的药物。
本发明提供了新化合物的药物组合物，所述药物组合物包括该4，4'-(pyridine-3，5-diyl)bis(benzene-1，2-diol)或其药学上可接受的衍生物及其盐类。
进一步地，所述的药物组合物为药物制剂，其是由该4，4'-(pyridine-3，5-diyl)bis(benzene-1，2-diol)或其药学上可接受的衍生物及其盐类作为活性成分和药学上可接受的赋形剂组成。
其中固体制剂包括：片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；半固体制剂包括软膏剂、栓剂等；液体制剂包括：溶液剂、注射剂、喷雾剂等；眼用制剂包括：滴眼剂、眼用凝胶剂等。
本发明实施例还提供了一种化合物的提取方法，该提取方法用于提取上述实施例提供的该含吡啶的化合物，该提取方法包括如下步骤：
日本琵琶甲50kg，粉碎，用70％乙醇冷浸提取3次，每次48h，6倍体积，不断搅拌，过滤，减压回收乙醇，得浸膏4kg，悬浮于酸水，调节ph1–2，用乙酸乙酯等体积萃取4次，得到非生物碱部分1kg和酸水；
所述酸水用碱调ph至中性或弱碱性，用乙酸乙酯等体积萃取4次，得到生物碱部分300g；
所述生物碱部分(300g)用mcigelchp20p柱层析，甲醇/水(10：90，20：80，30：70，40：60，50：50，60：40，70：30，80：20，90：10，100：0)梯度洗脱，tlc检测合并相同流份，得5个馏分段：fr.a、fr.b、fr.c、fr.d和fr.e；
将所述fr.d(20g)经sephadexlh-20柱层析分离，甲醇洗脱，合并得到4个部分：fr.d1、fr.d2、fr.d和fr.d4；
所述fr.d2(8g)再经硅胶柱层析划段，氯仿/甲醇梯度洗脱(30：1，20：1，15：1，10：1，7：1，5：1，3：1)得到7个馏分段：fr.d2.1、fr.d2.2、fr.d2.3、fr.d2.4、fr.d2.5、fr.d2.6和fr.d2.7；
所述fr.d2.5(300mg)经sephadexlh-20柱层析(甲醇洗脱)分离后进一步使用半制备rp-18hplc(甲醇/水30：70，流速：3ml/min)纯化得所述含吡啶的化合物(13mg，tr＝10.5min)。
进一步地，所述的化合物是通过从日本琵琶甲虫中提取获得或通过人工合成获得。
上述实施例具有以下有益效果：
1.本发明首次公开了从日本琵琶甲虫中提取分离所述的化合物4，4'-(pyridine-3，5-diyl)bis(benzene-1，2-diol)的方法。
2.本发明所述的化合物4，4'-(pyridine-3，5-diyl)bis(benzene-1，2-diol)是首次从日本琵琶甲虫分离鉴定得到的化合物，其活性与昆虫的功效吻合。
3.本发明所述的化合物4，4'-(pyridine-3，5-diyl)bis(benzene-1，2-diol)具有抑制cox-2活性的作用，具有潜在抗炎症作用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述，但不以此来限定本发明。
实施例1本发明所述化合物的提取分离及结构鉴定
日本琵琶甲50kg，粉碎，用70％乙醇冷浸提取3次，每次48h，6倍体积，不断搅拌，过滤，减压回收乙醇，得浸膏4kg，悬浮于酸水，调节ph1–2，用乙酸乙酯等体积萃取4次，得到非生物碱部分1kg。剩余酸水层用碱调ph至中性或弱碱性，用乙酸乙酯等体积萃取4次，得到生物碱部分300g。生物碱部分(300g)用mcigelchp20p柱层析，甲醇/水(10：90，20：80，30：70，40：60，50：50，60：40，70：30，80：20，90：10，100：0)梯度洗脱，tlc检测合并相同流份，得fractionsa-e共5个馏分段。fr.d(20g)经sephadexlh-20柱层析分离，甲醇洗脱，合并得到4个部分，d1-d4。fr.d2(8g)再经硅胶柱层析划段，氯仿/甲醇梯度洗脱(30：1，20：1，15：1，10：1，7：1，5：1，3：1)得到7个馏分段，d2.1-d2.7。fr.d2.5(300mg)经sephadexlh-20柱层析(甲醇洗脱)分离后进一步使用半制备rp-18hplc(甲醇/水30：70，流速：3ml/min)纯化得化合物4，4'-(pyridine-3，5-diyl)bis(benzene-1，2-diol)(13mg，tr＝10.5min)。化合物结构鉴定如下：
化合物4，4'-(pyridine-3，5-diyl)bis(benzene-1，2-diol)，淡黄色固体，uv(meoh)λmax(logε)207(4.30)，242(4.00)，331(3.85)nm；esimsm/zm/z296[m+h]+；hresimsm/z296.0919[m+h]+(calcdforc17h13no4，296.0917)，1h(600mhz)and13cnmr(150mhz)data，见表1。
表1.化合物的1h和13cnmr数据
实施例2化合物抑制cox-2测试方法
本实验用cayman’scoxfluorescentinhibitorscreeningassaykit来检测cox-2的酶活性。具体步骤如下：
化合物梯度稀释：先将化合物用dmso溶解成10mm储存液，并用dmso1：3梯度稀释成10个浓度梯度的1000×化合物系列浓度储存液，再转移至化合物转移仪器适配的384pp板中备用。
每孔加入酶稀释液10μl，空白对照孔不加酶加入10μl1xassaybuffer。
将化合物将转移到20nl1000×梯度浓度稀释好的化合物加入到反应液中，空白对照及dmso对照孔中加入dmso。室温孵育10-15min。
用1xassaybuffer稀释荧光底物adhp及辅酶heme，heme稀释倍数为100倍，adhp稀释倍数为40倍。每孔加入4μladhp稀释液及4μlheme稀释液。
用水配制底物花生四烯酸与氢氧化钾工作液，稀释倍数均为40倍。每孔加入2μl底物，马上用酶标仪动态检测531/595nm处荧光信号。
结果显示，本发明化合物在浓度30μm时具有显著抑制cox-2活性，抑制率达到99.6％，其ic50值为0.90μm。鉴于cox-2和炎症的密切关系，且加上其来源昆虫系民族药，具有显著的消炎作用，因此该化合物在炎症方面具有较好的应用前景。
实施例3
实施例1中化合物，按常规法加注射用溶媒，精滤，灌封灭菌后可制成注射液。
实施例4
实施例1中化合物，将其溶于无菌注射用水中，用无菌漏斗过滤，分装，低温冷冻干燥后无菌熔封即得粉针剂。
实施例5
实施例1中化合物，按常规法配以各种药用辅料可制成片剂或胶囊剂。使用实施例1中化合物作为药物活性成分，使用几种常规赋形剂作为制备组合药物片剂或胶囊剂的辅料成分，按照常规方法制成每片或每粒胶囊含有药物成分10-300mg的样品。
在上述实施例中，对各个实施例的描述都各有侧重，某个实施例中没有详述的部分，可以参见其它实施例的相关描述。
上述实施例具有以下有益效果：
1.本发明首次公开了从日本琵琶甲虫中提取分离所述的化合物4，4'-(pyridine-3，5-diyl)bis(benzene-1，2-diol)的方法。
2.本发明所述的化合物4，4'-(pyridine-3，5-diyl)bis(benzene-1，2-diol)是首次从日本琵琶甲虫分离鉴定得到的化合物，其活性与昆虫的功效吻合。
3.本发明所述的化合物4，4'-(pyridine-3，5-diyl)bis(benzene-1，2-diol)具有抑制cox-2活性的作用，具有潜在抗炎症作用。
以上为对本发明所提供的一种含吡啶的化合物及其提取方法的描述，对于本领域的技术人员，依据本发明实施例的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。