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荧光标记系列:荧光标记多种外泌体(定制含步骤)

作者:瑞禧生物 发布时间:2022-11-17 14:59:20 次浏览

荧光标记外泌体外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、促进肿瘤发生和转移等作用;此外,外泌体还可以作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。外泌体标记或示踪技术:对分离的外泌体进行体外标记或活体示踪。将标记的外泌体加入受体细胞培养基中,与受体细胞进行共培养,观察细胞的功能变化,如细胞增殖、迁移与侵袭、细胞凋亡等;或者将外泌体注射入动物模型中,观察动物表型变化和检测动物相关指标。
制备荧光标记外泌体的步骤如下∶1.取200 ug/ml的C5-马来酰亚-Alexa488(绿色荧光)或C5-马来酰亚-Alexa633(红色荧光)2.5 ul,加入提取好的含60- 100 ug蛋白质的30ul外泌体样品中,以PBS补足至50ul ,不搅拌的情况下于暗室中室温孵育60分钟。⒉.在孵育时将exosome spin columns ( Invitrogen )试剂盒按照说明书准备好并将粉末树脂于室温下水合15-30分钟。3.将装有柱子的收集管于离心机水平转子中以750x g离心2分钟,弃收集管,向树脂中加入荧光染料孵育后的外泌体4.将柱子置于1.5ml微量离心管750x g离心3分钟,多余的染料会被树脂吸附5.荧光标记后的外泌体缓慢加入1000ul不含酚红的DMEM,于0.22um过滤膜过滤后。分装并储存于负80度备用。
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