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146368-16-3|Cy3-N-羟基琥珀酰亚胺酯

作者:146368-16-3|Cy3-N-羟基琥珀酰亚胺酯 发布时间:2022-09-23 14:30:52 次浏览

146368-16-3|Cy3-N-羟基琥珀酰亚胺酯

 

产品描述:

Cyanine3(Cy3),是花青素荧光素染料家族的成员之一,是化学合成的聚甲炔染料。目前Cyanine系列染料以两种异构体的形式供货,一种是非磺化花青素(non-sulfonated cyanines),一种是磺化花青素(sulfonatedcyanine)。两者的光谱性质几乎*,因此大部分应用可相互替换,比如,都可用于标记DNA或蛋白等生物分子。两者的主要区别在于:磺化染料是水溶性的,在水相的标记反应体系内不需要使用有机共溶剂,并且降低染料在水中聚集的可能性,增强标记效率。

本Cy3 NHS ester,即含N-羟基琥珀酰亚胺(N-Hydroxysuccinimide)活化基团的Cy3,可直接与生化分子上的氨基(-NH2)反应形成稳定的酰胺键,主要是伯胺。

            146368-16-3|Cy3-N-羟基琥珀酰亚胺酯(图1)

  146368-16-3|Cy3-N-羟基琥珀酰亚胺酯

 

一般特性:

外观:

red powder

质谱分析M+增量:

474.2

分子量:

590.15

分子式:

C34H40ClN3O4

溶解性:

soluble in organic solvents (DMF, DMSO, dichloromethane), insoluble in water

质量控制:

NMR 1H and HPLC-MS (95%)

储存条件:

Storage: 24 months after receival at -20°C in the dark. Transportation: at room temperature for up to 3 weeks. Avoid prolonged exposure to light. Desiccate.

 

光谱特性:

 zui大激发波长, nm:

555

在zui大激发波长下的消光系数, Lmol-1cm-1:

150000

zui大发生波长, nm:

570

荧光量子产率:

0.31


运输和保存方法:

冰袋运输。-20℃干燥避光保存,有效期1年。

注意事项

1)NHS ester基团对湿度非常敏感,务必干燥保存产品。使用前产品需放到室温回温至少20min。

2)NHS ester基团的水解发生在水溶性缓冲体系属于竞争性反应。对蛋白/多肽(浓度:1-1mg/ml)伯胺的连接反应建议在pH 7-9范围内进行。使用不含氨基的缓冲体系,pH 7-9。比如100 mM 磷酸钠,150 mM 氯化钠, pH7.5; 100mM Hepes, pH 7.5。100 mM 碳酸钠/碳酸氢钠, pH 8-9;或100mM硼酸缓冲液, pH 8-9。

3)不要使用含伯胺的任何缓冲液,比如Tris,甘氨酸。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

 

使用方法:(用Cy3-NHSEster 标记抗体)

【注意】:可参考本方法进行多肽,蛋白或者其他分子的标记,需要根据具体的实验体系对合适的标记缓冲体系,样本浓度,染料浓度等参数做出合适的调整。

1)用不含氨基的合适的缓冲液(eg.100mM磷酸钠,150mM NaCl, pH7.5)溶解抗体使其浓度达到1-5mg/ml。【注】:如抗体中有残留Tris或 glycine 污染,则需透析或者脱盐到合适的缓冲液内。

2)使用前,用适量去离子水或者无水DMSO溶解Cy3-NHS,使其摩尔浓度为抗体摩尔浓度的400倍,例如,待标记的IgG浓度为1mg/ml(eg 6.7μM),则溶解后Cy3-NHS的浓度为2.7mM;如待标记的IgG浓度为2.5mg/ml,则溶解后Cy3-NHS的浓度为6.75mM;

3)向抗体中加入适量Cy3-NHS试剂,以达到预期的标记效率。【注】:当用Cy 3 NHS ester标记抗体或其他蛋白,亮度zui高的偶联物其染料/蛋白的比率为4-12,取决于特定的应用。过高比率会增加非特异性背景,丧失抗体特异性结合,导致聚集。建议根据应用优化标记比率。

4)室温孵育60min(或更长);

5)利用合适缓冲液透析或脱盐柱去除未反应的试剂;

6)分别在280nm和550nm检测Cy3-抗体的吸光值;

7)测定Cy3标记效率(DOL)和标记浓度。见下公式。

公式一. 利用下面公式计算Cy3标记效率(DOL)及其浓度(mg/ml)

E.1  Number of Cy3 dye per protein=molarity Cy3  dye / molarity protein

E.2  [Molarity of Cy3 dye]=A555/ε555

E.3  [Molarity of protein]=A280C/ε280

E.4  mg/ml=[A280-(A555×0.08)/(E1%/10)]×dilution  factor

【注】上述参数如下:

A555=conjugate  absorbance at 555±2nm

ε555=molarextinction  coefficient Cys dye =150000M-1cm-1

A280=  conjugate absorbance at 280nm

A280C  =corrected conjugate absorbance at 280nm= A280-( A555×0.08)

ε280= molarextinction  coefficient protein(M-1cm-1)=MWp×E1%/10

 

其它染料列表:

N-羟基琥珀酰亚胺脂Dye NHS esters

Pyrenebutyric acid NHS ester

ROX NHS ester, pure 6- isomer

BDP FL NHS ester

FAM NHS ester

Cyanine3 NHS ester

Cyanine3.5 NHS ester

Cyanine5 NHS ester

Cyanine5.5 NHS ester

Cyanine7 NHS ester

Cyanine7.5 NHS ester

Sulfo-Cyanine3 NHS ester

Sulfo-Cyanine5 NHS ester

sulfo-Cyanine5 bis-NHS ester

Sulfo-Cyanine7 NHS ester

马来酰亚胺 Dye maleimides

Pyrene maleimide

BDP FL maleimide

Cyanine3 maleimide

Cyanine5 maleimide

Cyanine5.5 maleimide

Cyanine7 maleimide

Cyanine7.5 maleimide

Sulfo-Cyanine3 maleimide

Sulfo-Cyanine5 maleimide

伯胺 Primary amine

BDP FL amine

Cyanine3 amine

Cyanine5 amine

Cyanine5.5 amine

Cyanine7 amine

Cyanine7.5 amine

Sulfo-Cyanine5 amine

Sulfo-Cyanine7 amine

酰肼 Dye hydrazides

Pyrene hydrazide

BDP FL hydrazide

Cyanine3 hydrazide

Cyanine5 Boc-hydrazide

Cyanine5 hydrazide

Cyanine5.5 hydrazide

Cyanine7 hydrazide

Cyanine7.5 hydrazide

马来酰亚胺 Dye maleimides

BDP FL maleimide

Cyanine3 maleimide

Cyanine5 maleimide

Cyanine5.5 maleimide

Cyanine7 maleimide

Cyanine7.5 maleimide

Sulfo-Cyanine3 maleimide

Sulfo-Cyanine5 maleimide

羧酸 Carboxylic acids

Pyrenebutyric acid

BDP FL carboxylic acid

Cyanine3 carboxylic acid

Cyanine3.5 carboxylic acid

Cyanine5 carboxylic acid

Cyanine5.5 carboxylic acid

Cyanine7 carboxylic acid

Cyanine7.5 carboxylic acid

Sulfo-Cyanine3 carboxylic acid

Sulfo-Cyanine5 carboxylic acid

Sulfo-Cyanine7 carboxylic acid

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SYBR Green I for Real Time PCR, 100x

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三磷酸酯修饰 Modified triphosphates

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