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HRP(辣根过氧化物酶)标记单、多克隆抗体的方法

作者: 发布时间:2023-01-29 10:37:01 次浏览

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HRP(辣根过氧化物酶)标记单克隆抗体的方法
酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结
合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。
戊二醛二步法
1.原理:戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。
2.标记步骤:
(1)称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中,于室温静置过夜。
(2)反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱,用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分
钟,收集棕色流出液。如体积大于5ml,则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中,缓慢搅拌。
(3)将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml,搅拌下逐滴加入酶溶液中。
(4)用1M PH9.5碳酸缓冲液0.25ml,继续搅拌3?小时。
(5)加0.2M赖氨酸0.25ml,混匀后,置室温2小时。
(6)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵,置4℃1小时。
(7)3000rpm离心半小时,弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次,最后沉淀物溶于
少量0.15M PH7.4的PBS中。
(8)将上述溶液装入透析袋中,对0.15M PH7.4的PB缓冲盐水透析,去除铵离子后(用
萘氏试剂检测),10,000rpm离心30分钟去除沉淀,上清液即为酶结合物,分装后,冰冻保存。
可定制HRP(辣根过氧化物酶)标记的单克隆抗体有:
可提供HRP辣根过氧化物酶,生物素,FITC等标记各种单克隆抗体,多单克隆抗体。
运输说明:
极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入瑞禧生物的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送至客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
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